کلون‌کردن ژن آنتی‌ژن ایمنی‌بخشBacillus anthracis در Bacillus subtilis
نویسندگان
چکیده مقاله:
سابقه و هدف: آنتی‌ژن ایمنی‌بخش(PA) (Protective antigen) Bacillus anthracis به‌عنوان واکسن سیاه زخم مورد استفاده قرار می‌گیرد. کلون و بیان ژن PA در سویه‌های مختلف گزارش شده است که بیش‌ترین بیان، در B. subtilis تا μg/ml 160 بوده است. هدف از این تحقیق کلون کردن ژن PA در ناقل بیان‌کننده pWB980 و انتقال آن به B. subtilis سویه WB600 می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه پلاسمید pXO1 از B. anthracis سویه Stern با روش قلیا جدا و ترادف بازی kb 4/2 ژن با استفاده از PCR تکثیر گردید. قطعه تکثیر یافته به‌طور مستقیم بر روی ناقل pTZ57R کلون و با استفاده از روش CaCl2 به E.coli سویه DH5α انتقال یافت. سپس ژن با آنزیم‌های SalI و KpnIاز روی T-Vector جدا گردید. واکنش اتصال بین قطعه ژن خالص شده PA و ناقل pWB980 گذاشته شد و سپس با روش Electroporation در V 1000 به B. subtilis منتقل شد. یافته‌ها: در این تحقیق توانستیم ژن PA را به‌وسیله PCR از B. anthracis سویه Stern جدا و ابتدا در پلاسمید pTZ57R کلون کرده و وجود ژن با تجزیه و تحلیل آنزیمی، واکنش PCR و تعیین ترادف بازی (Sequencing) تأیید گردید. سپس ژن بر روی ناقل بیان‌کننده pWB980 و در B. subtilis کلون و وجود ژن در دو کلنی مقاوم به کانامایسین AMN1 و AMN3 با استفاده از تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش PCR تأیید گردید. نتیجه‌گیری: در این تحقیق با تغییر در روش‌های مورد استفاده و استفاده از ناقل بیان‌کننده pWB980 توانستیم ژن PA را درB. subtilis کلون کنیم. این ژن برای اولین بار در ایران جدا و کلون شده است؛ هم‌چنین این تحقیق اولین کار کلون کردن ژن در میزبان B. subtilis در ایران می‌باشد.
منابع مشابه
کلون کردن ژن آنتی ژن ایمنی بخشbacillus anthracis در bacillus subtilis
سابقه و هدف: آنتی ژن ایمنی بخش(pa) (protective antigen) bacillus anthracis به عنوان واکسن سیاه زخم مورد استفاده قرار می گیرد. کلون و بیان ژن pa در سویه های مختلف گزارش شده است که بیش ترین بیان، در b. subtilis تا μg/ml 160 بوده است. هدف از این تحقیق کلون کردن ژن pa در ناقل بیان کننده pwb980 و انتقال آن به b. subtilis سویه wb600 می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه پلاسمید pxo1 از b. anthracis س...
متن کاملEnvironmental Persistence of Bacillus anthracis and Bacillus subtilis Spores
There is a lack of data for how the viability of biological agents may degrade over time in different environments. In this study, experiments were conducted to determine the persistence of Bacillus anthracis and Bacillus subtilis spores on outdoor materials with and without exposure to simulated sunlight, using ultraviolet (UV)-A/B radiation. Spores were inoculated onto glass, wood, concrete, ...
متن کاملMethionine regeneration and aminotransferases in Bacillus subtilis, Bacillus cereus, and Bacillus anthracis.
The conversion of ketomethiobutyrate to methionine has been previously examined in a number of organisms, wherein the aminotransferases responsible for the reaction have been found to be members of the Ia subfamily (L. C. Berger, J. Wilson, P. Wood, and B. J. Berger, J. Bacteriol. 183:4421-4434, 2001). The genome of Bacillus subtilis has been found to contain no subfamily Ia aminotransferase se...
متن کاملFormaldehyde gas inactivation of Bacillus anthracis, Bacillus subtilis, and Geobacillus stearothermophilus spores on indoor surface materials.
AIMS To evaluate the decontamination of Bacillus anthracis, Bacillus subtilis, and Geobacillus stearothermophilus spores on indoor surface materials using formaldehyde gas. METHODS AND RESULTS B. anthracis, B. subtilis, and G. stearothermophilus spores were dried on seven types of indoor surfaces and exposed to approx. 1100 ppm formaldehyde gas for 10 h. Formaldehyde exposure significantly de...
متن کاملProteomic analysis of the spore coats of Bacillus subtilis and Bacillus anthracis.
The outermost proteinaceous layer of bacterial spores, called the coat, is critical for spore survival, germination, and, for pathogenic spores, disease. To identify novel spore coat proteins, we have carried out a preliminary proteomic analysis of Bacillus subtilis and Bacillus anthracis spores, using a combination of standard sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis separatio...
متن کاملHtrC is involved in proteolysis of YpeB during germination of Bacillus anthracis and Bacillus subtilis spores.
Bacterial endospores can remain dormant for decades yet can respond to nutrients, germinate, and resume growth within minutes. An essential step in the germination process is degradation of the spore cortex peptidoglycan wall, and the SleB protein in Bacillus species plays a key role in this process. Stable incorporation of SleB into the spore requires the YpeB protein, and some evidence sugges...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 6 شماره 3
صفحات 201- 206
تاریخ انتشار 2005-05
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023